Первая страница
Наша команда
Контакты
О нас

    Главная страница


Дополнительного педагогического




страница7/15
Дата15.05.2017
Размер3.46 Mb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   15

Воспоминания ветеранов Полярных конвоев

Начальник отдела судоперевозок в Мурманске с американской стороны обращается к группе соотечественников 8 августа 1942 года, характеризуя сложившуюся ситуацию таким образом:



«Вам предстоит оказаться на берегу в стране, совершенно не похожей на любое другое место, где вам приходилось быть до этого. Эта страна перенесла все тяготы и лишения войны и ей необходимы наша помощь и сотрудничество. Вам придется находиться здесь достаточно долго, чтобы убедиться в том, что деньги здесь ничего не значат.<…> для каждого из вас найдется место для сна и достаточное количество неприхотливой пищи, чтобы сохранить здоровье. Но, к сожалению, помимо самого необходимого, вы ряд ли можете на что-то рассчитывать».

Судя по высказыванию не сложно понять, что люди прекрасно осознавали, на что они идут, и были готовы пожертвовать собой:

«Мы прошли сквозь туман, минные поля, айсберги и снежные заряды. Мы отбили все атаки врага с моря и с воздуха. И мы доставили свой груз».

Во II главе работы авторы упоминали о трагической судьбе PQ-17. Один из оставшихся в живых участников этого конвоя пишет:



«Нам рассказали, что если мы окажемся в такой водице, то мы сможем продержаться в ней от силы одну-полторы минуты. Большинство моряков, которых не успевали быстро вытащить из студеной воды, умирали».

Около 500 моряков союзных конвоев погибли в ходе операций по проводке Северных конвоев. Были и случаи великого спасения, как, например, этот:

«Когда мы шли в конвое, был очень сильный шторм. И матрос, кажется, его звали Бурлаков, пробегая по палубе, был смыт в океан волной. И следующей же волной был вернут обратно на корабль. Это было настоящее чудо»50.

«Что бы не случилось, я просто должен был оставаться там, где я был»51 - такая фраза часто встречается в воспоминаниях ветеранов, побывавших на суднах конвоев.

Время от времени между моряками торгового флота и моряками военных кораблей возникали конфликты, их связывали отнюдь не дружеские отношения. Связано это было с политическими убеждениями:

«В самом начале конвойных операций среди радистов на судах конвоев обнаружилось значительное число обладателей партийных билетов членов коммунистической партии. Речь идет о членах Коммунистической партии США – американских коммунистах…Они полагали, что их сразу отправят в Москву, где Сталин дожидается их как дорогих гостей, или что-то в этом роде», - так пишет ветеран военно-морских сил.

Однако, когда есть общий враг, люди готовы идти против принципов ради общей цели. Американские моряки, оказавшиеся в портах Северной России, обычно испытывали искреннюю симпатию и уважение к простым русским людям, с которыми их свела судьба.



«Одна из хозяек этого клуба по имени Таня, танцуя со мной, прижавшись щекой к щеке, пыталась обсуждать идеи Карла Маркса», - со мехом вспоминает ветеран торгового флота.

«Американцы в Мурманске вели себя очень дружелюбно по отношению к русским, русские платили им той же монетой. Нас связывали самые сильные братские чувства». Отставной офицер ВМС США писал о том, что его служба в Мурманске во времена Второй мировой войны связана с самыми приятными воспоминаниями. С ним соглашается и бывший моряк: «Я восхищался и до сих пор восхищаюсь русскими людьми за то, что они сделали во время этой войны».

«Вот так в первый раз мое судно потопили. Но до этого я уже два раза в воде побывал — раньше еще, когда мы в конвоях шли. Но это было так — выскочил и сразу же меня подобрали. Один раз от взрыва бомбы так качнуло, что смыло волной. А другой раз от взрыва с мостика выбросило воздушной волной. Тогда сильно ушибся. Первый раз меня наши подняли — круг спасательный бросили. А второй раз корветы охранения подобрали. Нас там много в воде оказалось — рядом потопили транспорт. Тогда мне здорово врезалась в память одна деталь — корветы вылавливали “ утопленников” по способу близнецового трала. Так рыбу ловят — два судна тянут между собою сеть. Вот так и нас тянули. Многие попавшие внутрь сети захлебывались раньше, чем их оттуда вытаскивали. А я, чтобы не попасть в общую кучу живых и мертвых тел, нырнул под сеть и схватился за нее с наружной стороны. Да…

Да, это было в конвое. А тут я остался совершенно один. Тех, кто за плот цеплялись, разнесло в разные стороны. Темно, никого и ничего не видно. Ну, думаю, что в таком состоянии уже не человек в воде болтается, а что-то такое… Черт его знает»

(из воспоминаний капитана дальнего плавания Лепке Е.Н.)

Что же касаемо отношений между моряками союзных флотов из их германскими противниками, то они не питали друг к другу особой враждебности. Особенность Северных конвоев как раз в этом, ибо сражения на сухопутном фронте порождали в сердцах сражающихся самые жестокие чувства. Полярным конвоям сопутствовал особый драматизм в современной войне машин. Люди, управлявшие этими машинами, убивали других людей, не испытывая к ним враждебных чувств или сильной ненависти.

Моряк торгового судна конвоя PQ-16, рассказывает: «Я слышал, как несколько наших ребят рассказывали, что пилоты некоторых самолетов, выходя в атаку и поливая судно огнем из пулеметов, покачивали крыльями, как бы говоря: «Я не держу на вас зла, а просто делаю свое дело». Мы не испытывали ненависти к немцам тогда, не испытываем ее сейчас. Мы представляли собой живую мишень».
Общение с представителями британской ассоциации «HMS Belfast»

Авторы также хотели бы рассказать про опыт общения с представителями ассоциации «HMS Belfast» и о невероятной помощи, которую любезно оказал член этой организации осенью 2014 года.

Чтобы узнать больше об участниках морских операций авторы обратились к Интернет-ресурсам. В результате продолжительных поисков был обнаружен веб-сайт, который содержал информацию о крузере под названием HMS Belfast, являющимся в данный момент водным музеем-памятником и находящимся в Лондоне. С 1999 года, существует ассоциация, основанная в честь этого судна. На веб-сайте авторы нашли данные для связи с организацией, после чего отправили письмо с просьбой о помощи в поиске материалов, посвященных Северным конвоям. Через два дня авторы получили ответ на письмо от одного из членов этой ассоциации – господина Wally Filby (Honorary Administrator). ПРИЛОЖЕНИЕ 5.

В ходе переписки с великодушным британцем, авторы узнали много новой и полезной информации по данному вопросу, после чего по инициативе мистера Филби авторам было отправлено из Великобритании в Россию две посылки (фото в приложении), содержимое которых составляли: книга «Men of the Sea», автором которой является Эрнест Смит, страница из газеты «THE TIMES», имеющая информацию о Северных конвоях, печатное издание о поездке членов «HMS Belfast» в Петербург в августе 2014 года; CD- диск с фотографиями из этой поездки; DVD-диск с фильмом «Last witness»; а также письмо от Wally Filby, адресованное авторам работы.

Авторы считают, что опыт такого незаменим и очень ценен. Ведь именно молодое поколение должно поддерживать связь со старшими. Если в мире еще остаются люди с добрым сердцем, как мистер Филби, то безусловно, межнациональное сотрудничество будет иметь место быть еще долгое время.

Посылки из Великобритании шли относительно недолго: около двух-четырех недель. Когда мы держали конверты в руках, ощущения были непередаваемые. Осознать, какое важное значение имеет союзничество былых лет для современного мира, к большому сожалению, удается далеко не всем. Благодаря тем уникальным материалам, которые находились в посылке, появился еще больший интерес к истории конвоев, а главное - появилось глубокое осознание темы исследовательской работы. Замечательно и то, что авторы смогли найти применение знаний иностранного языка при переводе фрагментов текстов и в ходе общения с британцами.

Выделяя из той необыкновенно интересной и захватывающей информации, полученной из Великобритании, важно заострить внимание на поездке членов «HMS Belfast association» в Санкт-Петербург в конце августа 2014 года.

«Мы были приглашены Российским клубом Арктических конвоев52, чтобы присутствовать на торжественной церемонии открытия памятника «В память о моряках Арктических конвоев», находящегося рядом с одним из корпусов колледжа в день 73-летия прибытия первого конвоя в Архангельск под кодовым названием «Дервиш». <…> Наша программа нахождения в СПБ начиналась с возложения венков на главном Петербургском Пискаревском мемориальном кладбище, затем мы отправились смотреть салют, который запускали с пушек Петропавловской крепости. <…> Понедельник был первым учебным днем в городе, так что наша группа ветеранов решила посетить как можно больше школ. Мы были поражены знаниями молодых людей, их уважением нашего поколения, которое защищало и отстаивало город и будущее страны во времена Великой Отечественной войны. <…> Более того, наши ветераны будто вновь стали молоды. Они танцевали и пели, в их-то 90 лет… Память о поездке будет со мной всегда, такие воспоминания сложно утратить…»53

Программа поездки в Санкт-Петербург членами ассоциации была очень насыщенной (приложение 3 содержит фото - материалы). В эти пять дней они успели побывать в музее на ледоколе «Красин», в школах города, где вели разговор о Второй мировой войне, на торжественной церемонии открытия памятника, а так же на Пискаревском мемориальном кладбище. Этому свидетельствует журнал «Seahorse», отправленный авторам из Великобритании. Это специальное издание ассоциации, содержащее полный отчет о поездке. Внутри содержится большое количество ярких фотографий, отражающих моменты пребывания членов ассоциации в Петербурге. Но, благодаря мистеру Филби, авторам также доступно более 100 фото, записанных на диске. Глядя на эти фотографии, можно понять, насколько важны такие встречи прежде всего для тех, кто сам участвовал в битвах и сражениях, кто пережил столько горя и смог остаться, прежде всего, человеком. Ветеранам очень приятно, когда молодое поколение проявляет большой интерес к тому, что было так давно, к тому, что стало целью их жизни… Мы должны хранить в своих сердцах память о величайшем подвиге этих людей и передавать её последующим поколениям.

«Я - вице-президент ассоциации «HMS Belfast». Наш кораблю играл огромную роль в защите конвоев, поставлявших помощь из Британии в Северную России во времена Второй Мировой войны. Я очень рад присутствовать здесь в день памяти о солидарности, оказанной в военное время Королевским Военно-морским флотом вам, нашим союзникам, на протяжении всей Великой Отечественной войны.

Наш корабль, HMS Belfast, признан одним из немногих кораблей, являющимися последними свидетелями этих героических событий 70 лет назад, и сейчас он, уже памятник находится на реке Темз в Лондоне. Мы очень благодарны за поддержку друзей и оказание помощи в сохранении корабля памятником для молодых и пожилых людей и в особенности для тех, кто непосредственно связан с великой Отечественной войной.

На данный момент мы живем в мире, полном проблем и жесткости. Нам следует посмотреть на участие во Второй мировой войне HMS Belfast и конвоев как на сигнальный огонь, чтобы вспомнить как работать вместе, чтобы сберечь мирное сосуществование».

Последняя фраза, пожалуй, является основной идеей, которую заложиди авторы в данную работы. Вице-президент ассоциации озвучил то, что все люди, осведомленные о действиях конвоев, безусловно, понимают и знают, что вернув былой дух единства, можно совершить великие дела.

Благодаря тому, что авторы получили фильм «Last witness» («Последний свидетель», - прим. авторов), появилась осведомленность о совместном проекте российский и английских представителей. Название проекта соответствует названию вышесказанного фильма. Он представляет собой реставрирование и сохранение «живым» корабля «HMS Belfast». Создателю проекта, Тиму Левину, судно близко сердцу, ведь оно имеет особое значение в истории его семьи. Его отец присоединился к Королевскому Военно-морскому флоту в августе 1939 года, тогда же, когда и корабль вступил в ряды защищавших конвоев бортов. Мистер Левин открыто и с душой говорит о том, как обратился к российским представителям с просьбой о помощи с реставрированием, ведь основной задачей он видел восстановление былых союзнических и дружеских отношений времен тех темных дней. Говоря об отношениях с русскими, Тим Левин с улыбкой на лице утверждает: «Это как раз тот момент, когда ты узнаешь кто твой настоящий друг - именно в тяжелые времена. Вы знаете, каждый является другом только в хорошее время».

Авторы планируют и дальше продолжать исследование по данной проблеме и в скором времени связаться с представителями ассоциации Полярных конвоев в Санкт-Петербурге.

В ходе проделанного исследования авторы убедились в важности конвойных операций в ходе Второй мировой войны. Это невероятное явление - становление братьями народов с разной культурой, экономическими и политическими убеждениями. Но страны антигитлеровской коалиции смогли преодолеть все трудности во взаимоотношениях и договор о союзных поставках в СССР был подписан очень оперативно. Заявление по радио У.Черчилля о необходимости оказания немедленной помощи Советскому Союзу свидетельствует о невообразимом желании и стремлении общими силами победить нацизм и фашизм.

Естественно, что по началу, учитывая внешнеполитическую ситуацию СССР, рассчитывать на помощь со стороны иностранных государств было непросто. Даже на момент подписания Первого протокола на Московской конференции в 1941 году недоверие прослеживалось в действиях прибывших представителей: говорили они осторожно, словами и обещаниями «не раскидывались». Даже поначалу было сказано, что именно те персоны, которые прибыли в Москву, не имеют права подписывать официальных документов, свидетельствующих о распространении закона о ленд-лизе на СССР. Но в ходе переговоров договоренность была достигнута, тем более, что первый союзный конвой под названием «Дервиш» прибыл в Советский Союз еще в августе 1941 года. Важно сказать, что все-таки именно желание искоренить нацизм и фашизм во имя мира во всем мире двигало тогда людьми и направляло их на путь к спасению.

После подписания странами официальной договоренности начались поставки товаров, так сильно необходимых стране. За период с 1941 года по 1945, через воды Арктики в Советский Союз прошло 40 конвоев в составе 811 судов. Из них 58 транспортов погибли на переходе и 33 вернулись в порты отправления. В обратном направлении из СССР в порты Великобритании и Исландии в составе 35 конвоев ушло 715 судов, из которых 29 погибли на переходе, а 8 – вернулись. Таким образом, в обоих направлениях за годы войны в Полярных конвоях весь маршрут прошли 1398 судов, потери составили 87 судов, 69 из которых пришлись на самый трагический 1942 год.

Полярные конвои сыграли значимую роль в мировой истории, эта помощь была необходима Советскому Союзу. Однако не стоит забывать, что стойкость и отвага русского солдата – есть самая важная составляющая победы. Моряки отличились небывалой стойкостью и мужеством. Не смотря на все препятствия и смертельную опасность, они продолжали выполнять свой долг.

Что же касается современной ситуации в отношениях между Россией и Великобританией, то ответ однозначен – дружественные отношения сохраняются, сотрудничество не прекращается. Этому свидетельствует существование ассоциаций, бережно хранящих память о Полярных конвоях в истории Второй мировой войны. Также проводится большое количество поездок и конференций, где выступают как сами ветераны, так и исследователи данной темы. Яркий пример сотрудничества приведен авторами в третьей главе данной работы - проект по реставрации судна, непосредственно сопровождавшего Северные конвои и участвовавшего в военных действиях на море. Нельзя не заметить и того великодушия, с которым и по сей день откликаются общественности члены британской ассоциации, желая сохранить теплые отношения между нашими государствами, а также передать последующим поколениям свою историю.

Подводя итог вышесказанному, можно с уверенностью сказать: история Полярных конвоев совершенно неоднозначная, в ней много секретов и тайн, которые, вполне возможно, не постижимы для нас. Но сколько бы времени не прошло с тех пор, память о героях должна жить в наших сердцах.

Задача молодого поколения, как считают авторы, не позволить уйти в прошлое тому единству союзников, которое зародилось в тяжелые для мира времена. Сколько бы не было различных разногласий, каким бы не было желание государства иметь мировое господство, ни в коем случае нельзя потерять то, что существует вот уже семь десятков лет. Союзные конвои – это проявление человеческой храбрости и силы воли.



PS. Авторы выражают благодарность представителю ассоциации «HMS Belfast association» мистеру Валли Филби за оказанную помощь в проведении исследования по вопросу Полярных конвоев.
Используемая литература

  1. Решающие конвойные битвы: [сб] - М.: АСТ: Транзиткнига, Р47 2005. -604, [4]с.: 32 л.ил.-(Военно-историческая библиотека).

  2. Война в Арктике (1939-1945 гг.). Составитель и научный редактор М.Супрун.-Архангельск: Приморский государственный университет,2001.-368 с.,ил.

  3. Гибель конвоя PQ-17.Величайшая военно-морская катастрофа Второй мировой войны.1941-1942 гг. / Пер. с англ Ю.В.Бехтина.-М.:ЗАО Центрполиграф, 2006.-349 с.-(За линией фронта. Военная история) Ирвинг Д.

  4. Гангут: сб.ст.-вып.63.-СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «Гангут», член ассоциации «Морское наследие России», 2011.-152 с.,ил.

  5. Ernest Smith «Men of the Sea» St Thomas Place, Ely, Cambridgeshire CB7 4GG,UK 2006.

  6. Супрун М. Ленд-лиз и северные конвои, 1941-1945 гг. 1977 г.

  7. Кузнецов Н.Г. Курсом к победе. М., 1975

  8. Советско-английские отношения во время Великой Отечественной войны 1941-1945. Документы и материалы: В 2 т. Т.1. 1941-1943 гг.М., 1983.

  9. Печатное издание «Seahorse», UK.

  10. Переписка Председателя Совета Министров СССР с президентами США и премьер-министрами Великобритании во время Великой Отечественной войны 1941–1945 гг. Т. 2М: Государственное издание политической литературы 1957 г

  11. http://stalinism.ru/

  12. http://arcticwar.pomorsu.ru/sea/nc3/oglavl_sk3.htm


Демографический портрет школы № 186
Домнина Настасия,

ученица 10 класса ГБОУ СОШ № 186,

руководитель - Алейникова Лилия Сергеевна,

учитель географии ГБОУ СОШ №
В последние годы очень часто по радио и телевидению мы слышим понятия: демография, демографическая ситуация, демографическая политика. А самое главное, в репортажах журналистов постоянно звучит зависимость будущего от этих понятий. Будущее - это мы и наше поколение, поэтому нам стало интересно о какой зависимости идет речь.

После изучения терминов задались вопросами:

- Как демографические проблемы страны отражаются на демографической ситуации моего города и школы?

- Исходя из данных по динамике численности учащихся, предположить, какие меры целесообразно применять для того, чтобы как можно дольше просуществовала наша школа, а значит и наш город, и наша страна?

Чтобы ответить на эти вопросы мы задались целью «нарисовать» современный портрет своей школы, и его изменения во времени.
Демографическая ситуация школы.

Для составления демографического портрета нашей школы нам нужно изучить численность учащихся школы за последние 10 лет, половозрастной и этнический состав учащихся.

Чтобы проследить динамику численности учащихся за 10 лет. Нам пришлось обратиться к заместителю директора по учебной части и проанализировать цифровые данные ежегодных статистических отчетов. Полученные данные были занесены в таблицы.

Численность учащихся школы №186 за последние 10 лет.





2004

2005

2006

2007

2008

2009

2010

2011

2012

2013

2014

Всего учащихся

876

772

684

603

593

587

547

576

554

566

564

Изучив данные, мы получили следующее: за пятилетний период (2004-2009гг.) количество учащихся сократилось на 289 человек. Уменьшение детей в школе хорошо просматривается на диаграмме.

После проглядывается более стабильное положение в динамике численности учащихся и за эти пять лет число учащихся увеличилось на 17 человек.

Нас заинтересовали эти результаты и мы решили сравнить данные численности населения города с данными о рождаемости и смертности за последние 10 лет. Для этого мы обратились за статистическими данными в отдел ЗАГС Администрации г. Санкт-Петербурга.[9]

Проанализировав данные, мы получили следующие результаты:

-увеличение числа родившихся на 26261 человек,

-уменьшилось число умерших на 14568 человек,

-увеличение численности населения на 507859 человек.

Из вышеуказанных данных мы сделали вывод, что в данный период наблюдается положительный прирост населения.

Скорее всего, это объясняется следующими причинами:

- в городе происходит постепенное увеличение рождаемости;

- высокомотивированные выпускники после школы приезжают в город с целью получения высшего образования в культурной столице России;

- часть населения иммигрирует по причине поиска более оплачиваемых мест работы и с целью карьерного роста, а также с целью более комфортных условий жизни.

Чтобы изучить ситуацию в школе мы разработали анкету «Что я знаю о себе».

Каждый учащийся школы ответил на вопросы анкеты:

Фамилия и имя

Год рождения

Пол


Национальность

Данные анкетирования представлены в работе в виде таблиц и диаграмм.



2.2 Половой состав учащихся школы.





















М

13

12

11

12

13

14

13

14

Ж

12

13

14

13

12

10

13

12



























10а

11а

М

16

16

12

12

11

12

15

15

14

14

16

14

Ж

16

16

13

13

13

12

15

15

13

11

14

16




Мальчики

277

Девочки

287

Полученные данные не соответствуют тому, что в России и в мире мальчиков рождается больше, чем девочек и их количество выравнивается только к 20 годам. Количество мальчиков и девочек хорошо просматривается на диаграмме. Анализ таблицы показал: сегодня в школе учится 277 мальчиков и 287 девочек. (см. Приложение №2). Преобладание количества девочек над мальчиками осуществляется за счет: 2 «А» (2006 гр), 7 «А» (2001 гр), 11 «А» (1996) классов. Мы сравнили наши данные с данными в целом по городу среди детей этих годов рождения. В 1996, 2001 и 2006 годах среди новорожденных преобладают мальчики (см. Приложение 2).[9]

Поэтому это погрешности нашего микрорайона.

Возрастной состав учащихся школы. [10]


Год

1995

1996

1997

1998

1999

2000

2001

2002

2003

2004

2005

2006

2007

Кол-во учащихся

10

44

39

52

60

48

50

64

52

49

55

44

2

Анализируя данную таблицу, мы определили, что в нашей школе обучается больше детей 1999 и 2002 годов рождения, то есть учащихся 5-х и 8-х классов. Сравнивая со статистическими данными, родившихся в городе за эти 12 лет (1995-2007), мы узнали. Что максимальное число рождаемости приходится на 2005 и 2006 годы. Низкий уровень рождаемости отмечается в 1997 году - это учащиеся 11-го класса. Мы считаем, что это тоже погрешности нашего микрорайона, так как, минимальное число рождений в городе приходится на 1999г. Данные предоставлены сотрудниками отдела ЗАГС Администрации Санкт-Петербурга.

На динамику численности населения России в 20 веке большое влияние оказали:


  1. Активное продвижение страны по пути демографического перехода, существенно снизившего рождаемость, смертность и естественный прирост населения.

  2. Демографические кризисы в результате войн, революций, репрессий и прочих социальных потрясений.

  3. Миграционный отток населения России первоначально за рубеж, а в последствии в союзные республики, особенно усилившийся в послевоенные годы, в 90-е годы, сменившиеся миграционным потоком из бывших союзных республик, а ныне суверенных стран ближнего зарубежья.

Увеличение количества родившихся в последние годы, мы считаем, объясняется проведением демографической политики как на государственном, так и на региональном уровнях: ипотека, помощь молодым семьям, различные виды пособий матерям – одиночкам, беременным женщинам, детям в возрасте до 3-х лет, бесплатное обеспечение медикаментами детей в возрасте до 3-х лет, единовременные губернаторские выплаты семьям при рождения ребенка. «материнский капитал» и т.д.

Этнический состав школьников.





Русские

Украинцы

Киргизы

Армяне

Азербайджанцы

Татары

Дагестанцы

Количество детей

470

6

8

14

31

9

16

Основное количество детей русские - 84%, азербайджанцы - 6%, дагестанцы - 3%.

Есть представители и других национальностей: армяне, татары, киргизы, украинцы. Сравним наши данные с национальным составом г. Санкт-Петербург: русские – 91%, украинцы – 5%, татары – 2%, азербайджанцы – 1,6%, армяне – 1%. Мы видим, что в нашей школе схожее распределение национальностей. Подобное распределение, на наш взгляд, является влиянием миграции (перенаселения населения) в Санкт-Петербурге в последние годы.

Составляя демографический портрет нашей школы, мы получили ответы на интересующие нас вопросы.

На основании полученных данных мы можем сделать вывод о том, что в школе обучаются представители семи национальностей, поэтому мы можем повлиять на толерантность в отношениях между учениками различных национальностей.

В нашей школе прослеживается уменьшение количество учащихся за пятилетний период и незначительное увеличение количества учащихся школы за последние пять лет. Несмотря на увеличение числа родившихся, потребность в увеличении рождаемости остается актуальной для сохранения положительного естественного прироста. Поэтому возникает необходимость планирования воспитательной работы с учащимися, направленную на увеличение количества детей, посредством создания ими в будущем многодетных семей.

Современные проблемы страны тоже сказываются на демографической ситуации нашего города. Будущее городов полностью зависит от демографической политики государства, которая должна быть направлена на развитие городов, на улучшения качества жизни в городах, на развитие отраслей промышленности. А также на привлечение инвестиций, на создание новых рабочих мест, на расширение базы наукоемких и трудоемких сфер деятельности. Будет увеличиваться численность населения города, соответственно количество детей школьного возраста и школы города, в том числе и наша, будут существовать многие годы.

Демографическая ситуация в моей школе, представленная в проекте довольно наглядно, отражает положение учеников в школах по всей стране. Подобные материалы могли бы давать вузам более наглядное представление о будущих абитуриентах, поможет им избежать многих проблем национального и экономического характера, а так же решить проблему с недобором на места или слишком большим конкурсом. Также наши материалы помогут администрации школы при анализе и планировании работы на будущее.

Российское образование претерпевает существенные изменения, обусловленные его стремлением соответствовать принципам демократизации, гуманизации, развития, глобальным тенденциям мирового образовательного процесса.

В последнее время идет много разговоров вокруг постановки воспитательной работы в школе. Это связано с опасением развития духовно-нравственного кризиса, поразившее современное общество.

Развитие интернета и компьютерных игр привило к тому, что школьники перестали читать книги, смотреть спектакли в театре. Компьютер заменил им живое общение – это приводит к потере способности к сопереживанию, к формированию потребительского поведения, утрате духовных ценностей, созданных народом на протяжении многих столетий. Происходит разрушение внутрисемейных ценностей, в силу занятости родителей дети предоставлены сами себе.

В настоящее время определенная часть учеников петербургских школ – это дети из других регионов России стран ближнего зарубежья. Дети разных национальностей, разных конфессий, самобытной системой культурных ценностей. Это и определило одно из направлений работы нашей школы – поликультурный аспект интеграции основного и дополнительного образования.

Наша школа расположена в одном из промышленных районов города. В настоящее время в ней обучаются дети 17 национальностей. Из нерусских национальностей преобладают армяне и азербайджанцы. Для этих детей русский язык не является родным. Многие из них фактически начинают его систематическое изучение в школе, а дома по-прежнему слышат и используют родной язык. Это затрудняет их обучение. Специфика работы педагогического коллектива школы связана с необходимостью организовать толерантное взаимодействие в классах детей разных национальностей через межкультурный диалог.

Я остановлюсь на некоторых моментах работы нашей школы в этом направлении:

Разработан проект «От изучения малой Родины к гражданственности», над которым работали дети разных национальностей, они были объединены единой целью, решали важные для себя задачи изучения родного края.


  1. Знакомство с храмами и монастырями Северо-запада России

  2. Изучение особенностей архитектуры, фресковой живописи, росписи храмов

  3. Сравнение храмов разных конфессий, существующих в нашем городе

  4. Обсуждение проблемы сохранения этих памятников русской культуры

Сравнивая христианское учение с положениями ислама, старшеклассники обнаруживают много общего, осознают, что система нравственных ценностей едина для людей разных вероисповеданий

2. Разработана программа «Русская культура. Годовой цикл народных праздников», которая в настоящее время расширяется в сторону изучения праздников других национальных культур.

Это изучение и разработка русских народных праздников, изучение обычаев и быта русского народа, создание рисунков, сказок, поделок.

3. Творческая работа «Моя родословная» вызвала в настоящее время огромный интерес не только у детей: в эту поисковую деятельность активно включились и родители.

Именно в семье формируются привычки, жизненные принципы. От того, как строятся отношения в семье, какие ценности, интересы здесь находятся на первом плане, зависит, какими вырастут дети.

В проект вошли разные мероприятия: классные часы, конкурсы, создание газет, сочинения, составление презентаций, гербы своего рода, схемы родословной.

Примеров из сочинений шестиклассников.

4. Большое поле деятельности дает использование поликультурного материала на уроках географии при изучении темы «Населения» с 6 по 11 класс:

Это и рефераты, проекты, исследования, творческие задания

Старшеклассники, зная, что мир велик и люди в нем живут по разному, задуматься о том, что их личная жизнь определяется не только религиозными, но и социальными и культурологическими факторами.

Работая над исследовательским проектом «Глобальные экологические проблемы» о сохранении планеты Земля, на которой живет человек нужно помнить - если при решении некоторых проблем не будет единства, то планете грозят неприятности.

Примером служит материк Антарктида. Когда человечество, обладая разными культурами, социально-экономическими различиями смогло договориться о его неприкосновенности.

5. С позапрошлого года мы стали участниками городского фестиваля «Культурной столице – культуру мира», где команда школы показала неплохие результаты.

Таким образом та большая работа, которая проводится в школе многонациональной и поликонфессиональной, создает предпосылки для создания условий эффективного решения проблемы формирования толерантного сознания и поведения учащихся.


Используемая литература

  1. Алисов Н. В., Хорев Б.С. Экономическая и социальная география мира (общий обзор): Учеб. Для вузов. – М.: Гардарики, 2012.

  2. Большой энциклопедический словарь. – М.: БРЭ, 2013.

  3. География. Экономическая и социальная география мира. 10 класс: учеб. Для общеобразоват. Учреждений / В. П. Максаковский. – 19-е изд. – М. : Просвещение, 2011. – 397 с.: ил., карт.

  4. Лаппо Г.М. География городов. – М.: ВЛАДОС, 1997.

  5. Народонаселение: Энциклопедический словарь. – М.: БРЭ, 2013.

  6. Перцик Е.Н. Города мира. География мировой урбанизации. – М.: Международные отношения, 2014.

  7. Статистические данные, предоставленные работниками отдела ЗАГС

  8. Цифровые данные статистических отчетов школы

Интернет-источники

1. http://demography.academic.ru/1608/

2, http://demography.academic.ru/1624
Семейный анализ в родословной с мутацией гена рецептора

липопротеинов низкой плотности

Марусова Тамара, Орлов Алексей,

ученики 11 класса, ГБОУ лицея №126

руководитель - Попова Людмила Павловна,,

учитель биологии ГБОУ лицея № 126

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются ведущей причиной смертности в большинстве стран мира, в том числе и в России. Одной из редких, но наиболее тяжело протекающих форм подобных заболеваний является семейная гиперхолестеринемия (СГ) – наследственная черта, приводящая к существенному повышению содержания уровня холестерина в плазме крови. Ее причиной служит неэффективное удаление липопротеинов низкой плотности (ЛНП) – основной транспортной формы холестерина из кровотока − вследствие дисфункции или количественного дефицита рецептора ЛНП (рЛНП) на поверхности клеток. Это заболевание наследуется как аутосомно-доминантный признак, и ее частая гетерозиготная форма встречается у каждого пятисотого человека в популяции, а редкая гомозиготная – с частотой 1 случай на миллион новорожденных. Диагностика СГ направлена не столько на предотвращение рождения гомозиготных больных, сколько на раннее выявление гетерозиготных больных. Этих больных при своевременном начале лечения можно спасти от осложнений ишемической болезни сердца (ИБС) в виде инфарктов миокарда (ИМ) и мозговых инсультов. Риск смерти от ИБС людей с СГ в 8 раза больше относительно общепопуляционного риска. Но после активного применения лекарств группы статинов как средства профилактики этот риск сократился после 1992 года до 3,7% [Мандельштам и др., 2004]. В России наиболее активно генетика СГ изучалась в Северо-Западном регионе страны, в Санкт-Петербурге и Республике Карелия [Захарова и др., 2007; Комарова и др., 2013]. Показано, что спектр мутаций, ведущих к этому наследственному заболеванию в России, своеобразен и специфичен для каждого исследуемого региона страны.

Впервые для выявления мутации I377I в гене рЛНП предложено применять рестриктазу Bse 3DI, а для носительства мутации 1686del8/insT – рестриктазу HaeIII и экспериментально показана эффективность рестрикционного анализа для идентификации носителей мутаций в семьях пробандов.

Целью нашего исследования являлось проведение молекулярно-генетического анализа в семье с СГ из Петрозаводска, в которой ранее методом секвенирования у пробанда были идентифицированы мутации гена рЛНП.

Соответственно, для достижения цели были поставлены следующие задачи:


  1. Амплифицировать методом ПЦР 9-ый и 11-ый экзоны гена рЛНП, в которых у пробанда были выявлены нуклеотидные замены, у пациентки, ее сына и сестры;

  2. подобрать рестриктазы для типирования мутаций с помощью анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализа);

  3. определить наличие мутаций у родственников пациентки и сделать предсказание относительно риска заболевания у сына пробаСГ является одним из наиболее распространенных моногенных заболеваний: её частота в популяциях людей белой расы составляет 1 случай на 500 обследованных [Goldstein et al., 2001; цит. по Захарова и др., 2007]. СГ передается как аутосомно-доминантный признак и имеет две формы: гетерозиготную (1:500) и гомозиготную (1:1000000 в соответствии с уравнением Харди-Вайнберга) [Goldstein et al., 2001; цит. по Захарова и др., 2007]. Семейная гиперхолестеринемия - это одна из наиболее ярко выраженных наследственных детерминант, определяющих развитие атеросклероза, ИБС и последующих ИМ. Причиной заболевания является снижение скорости катаболизма ЛНП вследствие количественной недостаточности или дисфункции их специфического рецептора, вызванное мутациями в кодирующем его гене [Goldstein et al., 2001; цит. по Захарова и др., 2007].

СГ исключительно генетически гетерогенна, т.к. дисфункция рецептора ЛНП может вызываться не только крупномасштабными перестройками локуса рЛНП (крупные делеции и инсерции, выявленные с помощью метода Саузерна [Мандельштам и др., 1995, 2004]), но также короткими делециями, и инсерциями, и точковыми мутациями (например, как в Санкт-Петербурге [Захарова и др., 2007]). Так, к 2003 году было упомянуто уже более 900 точковых мутаций гена рецептора ЛНП [Dedoussis et al., 2004]. При этом мажорные мутации встречаются почти исключительно в популяционных изолятах [Мандельштам и др., 2009]. Так, например, среди евреев-ашкенази Санкт-Петербурга обнаружена одна мажорная мутация G197del, выявленная приблизительно у 30% пациентов с СГ из этой этнической группы [Мандельштам и др., 1998, цит. по Захарова и др., 2007]. Среди славянского населения Санкт-Петербурга отсутствовали мажорные мутации: лишь 5 мутаций были идентифицированы в двух семьях, а 24 были найдены в единичных случаях, при этом 19 из них не встречались к тому же ещё ни в одной другой популяции мира [Захарова и др., 2007].

Важность исследования СГ безусловна, т.к., например, вероятность развития коронарного атеросклероза, вызывающего ИБС, и соответственно риск ИМ у пациентов с СГ существенно выше, чем у лиц без СГ. К 60 годам риск ИМ у пациентов с СГ составляет до 85,4% у мужчин и 56,5% у женщин [Мандельштам и др., 2004]. Средний возраст развития ИБС и связанного с ней инфаркта у мужчин с СГ составляет около 40 лет, у женщин – 50 лет. СГ приводит к существенному сокращению продолжительности жизни. Особенно значительно увеличение риска проявлений коронарного атеросклероза у молодых пациентов с СГ.

Первые работы [Мандельштам и др., 2004] показали, что риск фатального инфаркта в возрастном интервале между 20 и 39 годами увеличен приблизительно в 100 раз у пациентов с СГ по сравнению с лицами того же возраста из популяции, а относительный риск смерти по причине развития ИБС у пациентов с СГ в возрастном интервале 20-59 лет считался повышенным 8-кратно по сравнению с лицами из популяции. Разница в степени риска развития ИБС между пациентами с СГ и лицами из общей популяции падает с возрастом, и риск оказывается уже одинаковым у пациентов старше 60 лет. Существенно, что при своевременном начале лечения пациентов с гиперхолестеринемией в первую очередь препаратами группы статинов удается заметно снизить смертность от ССЗ. Так, после начала широкого применения статиновой терапии (после 1992 года) эта степень риска снизилась, и риск смерти от ИБС у пациентов с СГ оказался увеличенным не в 8 раз, а лишь в 3,7 раз по сравнению с общепопуляционным [Мандельштам и др., 2004]. Существует целый ряд убедительных доказательств значения статиновой терапии для снижения смертности от ИБС среди пациентов с высоким уровнем холестерина (например, исследование 4S [Scandinavian simvastatin…, 1994, цит. по Мандельштам и др., 2004]). Исследование WOSCOP показало эффективность статиновой терапии для снижения уровня смертности от ССЗ и у пациентов с повышенным уровнем холестерина без предсуществующей ИБС [Shepherd et al., 1995, цит. по Мандельштам и др., 2004].

Так как риск развития ИБС у лиц с СГ сильно повышен уже в молодом возрасте и имеется возможность снизить этот риск при своевременном выявлении заболевания и начале лечения, ранняя диагностика СГ чрезвычайно важна.

Диагностировать СГ можно, используя различные клинические данные, биохимические, цитологические, генетические методы.

Диагноз СГ устанавливается на основании семейной истории ИБС и наличия у пациента характерных клинических меток – сухожильных ксантом, особенно ксантом ахилловых сухожилий, а также пястно-фаланговых ксантом, ксантелазм (подкожных отложений холестерина) и липоидных дуг роговицы. Наличие сухожильных ксантом является надежным указанием на наличие СГ у пациента [Липовецкий, 2000]. Однако ксантомы развиваются лишь у 30% больных с гетерозиготной формой СГ, что не позволяет по причине их отсутствия исключить диагноз СГ. Кроме того, специфические метки СГ развиваются с возрастом, в связи с этим они могут отсутствовать у молодых пациентов.

На развитие ИБС могут также влиять различные факторы, никак не связанные с СГ, из чего следует, что необходимы дополнительные генетические тесты и анализ достаточно разветвленной родословной пробанда (для дифференцирования СГ от других мутаций, вызывающих гиперлипидемию). Чтобы достоверно диагностировать СГ, требуется наличие аккуратно собранных клинических данных о многих родственниках, и, желательно, в нескольких поколениях [Мандельштам и др., 2004].

Часто используемым квалифицированными врачами липидологами дополнением к клиническим признакам при диагностике СГ являются данные по определению липидного спектра плазмы крови (а не только уровня общего холестерина). У больных классической формой СГ сильно повышен общий холестерин, и особенно холестерин ЛНП, а уровень триглицеридов обычно соответствует норме [Липовецкий, 2000].

Но необходимо учитывать, что гиперлипидемия развивается с возрастом, и во многих случаях диагноз СГ на основании анализа липидов крови у детей поставлен быть не может, поэтому необходимы генетические тесты на выявление уже установленной мутации в семье пробанда. Существуют также так называемые мягкие формы СГ, когда мутации не слишком сильно нарушают функцию рЛНП, такие случаи также не будут диагностированы верно при использовании такого подхода, хотя при определенном сочетании генов, диеты [Мандельштам и др., 2004], образа жизни и страны происхождения пробанда могут привести к ИБС и тяжелым формам СГ.

Генетический тест позволяет установить наличие СГ независимо от исходного уровня липидов в плазме крови пациента. Также определение уровня липидов не позволило бы дифференцировать СГ без анализа больших родословных СГ от других первичных гиперхолестеринемий, приводящих к тому же фенотипу гиперлипопротеинемии типа IIа по Фредериксону, как, например, семейный дефект по апоB-100 [Мандельштам и др., 2004] или рецессивная гиперхолестеринемия [Мандельштам, Васильев, 2007, 2008].

Определение способности фибробластов, лимфоцитов и моноцитов пациента к связыванию и поглощению ЛНП позволяет, в отличие от других методов, разделить разные нозологические формы: дефектный по связыванию апоB-100 и СГ. Подобный тест дает точные количественные оценки степени дисфункции рецептора, а также указание на тип мутации.

Также с помощью культивируемых лимфоцитов можно выявить гетерозиготность или гомозиготность СГ [Мандельштам и др., 2004]. Данный тест основан на том, что в присутствии клеточных блокаторов синтеза холестерина и при наличии митогена скорость деления лимфоцитов зависит от скорости поставки экзогенного холестерина, необходимого для построения клеточных мембран из среды культивирования путем опосредованного рецепторами эндоцитоза. Таким образом, в этом тесте проверяется наличие функционирующих рЛНП на поверхности лимфоцитов, способных связывать экзогенный холестерин для новообразования мембран культивируемых лимфоцитов крови. При анализе результатов этого исследования было выявлено, что пролиферативный ответ, т.е. новообразование лимфоцитов в данных условиях, был наименее выражен у лимфоцитов гомозиготных больных с СГ, был наибольшим у лимфоцитов пациентов без СГ и промежуточным у пациентов с гетерозиготной формой СГ, что позволяло ставить дифференциальный диагноз заболевания.

В значительной мере всех недостатков цитологического метода, в первую очередь плохой воспроизводимости, лишен наиболее технологичный метод ДНК-диагностики. Этот метод не требует культивирования клеток больного, необходимого в цитологическом методе. ДНК-диагностика не только наиболее точный метод для постановки диагноза СГ, но и наиболее чувствительный. Он позволяет осуществлять диагностику при необходимости пренатально, в том числе на единичных клетках зародыша. Другие методы для этих целей абсолютно не применимы.

ДНК-диагностика СГ осложнена большим разнообразием мутаций в гене рецептора ЛНП (более 1000), вызывающих заболевание в мире и во всех популяциях, где ярко не выражен эффект основателя (относительно большие популяции, где невозможно определить мажорные мутации) [http://www.ucl.ac.uk/fh/]. Знание спектра мутаций является необходимой основой для проведения ДНК-диагностики в каждой стране или ее отдельных регионах. Даже прямое секвенирование кодирующей части гена, амплифицированной с помощью ПЦР, может не выявить значительного числа пациентов с СГ, поскольку этот метод не обнаруживает крупномасштабные перестройки локуса рЛНП, являющиеся в некоторых популяциях основной причиной возникновения СГ (протяженные делеции - до 50% у франкоговорящих канадцев). Поэтому для каждой популяции должен быть определен спектр мутаций, после чего выработана своя стратегия диагностики СГ: отсев случаев крупных перестроек с помощью ПЦР тестов на частые делеции, определение преобладающих точковых мутаций и т.д.

Другой проблемой ДНК-диагностики является выяснение вопроса о значении идентифицированной миссенс-мутации, т.е. оказывает ли она воздействие на развитие болезни или является нейтральным полиморфизмом [Мандельштам и др., 2004]. В случае рЛНП показано, что абсолютное большинство значимых (не синонимичных) нуклеотидных замен в кодирующей области ведет к развитию заболевания. Вместе с тем имеются и широко распространенные миссенс-мутации, как, например, T705I, она же вариант FH-Paris-9, наличие которых не приводит к развитию заболевания [Захарова и др., 2007].

Ясно, что после проведения ДНК- диагностики может потребоваться дополнительное использование цитологических методов для доказательства влияния мутации на функцию рЛНП.

Проблемой ДНК-диагностики является ее потенциально высокая стоимость в тех случаях, когда не известны национальные спектры мутаций. Существенным преимуществом ДНК-диагностики является возможность выявления СГ у детей, у которых еще не развилась в должной мере гиперхолестеринемия и тем более ИБС.

ДНК-диагностика позволяет начать превентивную терапию до развития признаков ИБС, что чрезвычайно существенно, поскольку в настоящее время 30% пациентов с недиагностированной ИБС погибают от внезапной смерти, а не от повторных инфарктов. Таким образом, ДНК- диагностика является наиболее эффективным и технологичным методом диагностики СГ [Мандельштам др., 2004].

Вопреки широко распространенным представлениям, моногенные заболевания являются причиной многих часто встречающихся патологий у пациентов не только детского, но и взрослого возраста. Более того, изучение генов и белков, функция которых нарушена при моногенных болезнях, позволило разработать новые лекарственные средства, которые широко применяются для лечения мультифакториальных и полигенных болезней. [Мандельштам, Васильев, 2008а]. Изучение моногенных заболеваний привело также к более взвешенному подходу к оценке генетических и негенетических факторов риска при мультифакториальных заболеваниях.

Второй аспект явной пользы от изучения моногенных заболеваний заключается в том, что одни и те же гены оказываются вовлеченными как в редкие семейные формы болезней, так и в часто встречающиеся мультифакториальные заболевания. Например, идентификация мутаций в редких финских семьях с комбинированной семейной гиперлипидемией позволила установить новый локус, вовлеченный в развитие такой часто встречающейся мультифакториальной патологии как метаболический синдром [Мандельштам, Васильев, 2008а].

Наконец, исследование моногенных заболеваний вносит существенный вклад в разработку лекарств, направленных на лечение широко распространенных патологий. Еще большее значение изучение моногенных заболеваний может сыграть в будущем при разработке пептидных лекарств, например, для лечения гиперхолестеринемических состояний. При разработке новых лекарств идентификация продуктов редких моногенных болезней будет иметь не апостериорное значение для объяснения механизма действия лекарств, но, напротив, будет важным для разработки принципиально новых фармакологических средств (изучение белка PCSK9 [Мандельштам, Васильев, 2008б]) .

Актуальна ДНК-диагностика моногенных заболеваний в России, поскольку спектры мутаций большинства генов в каждой стране и в каждой этнической группе сильно различаются. Поэтому для тестирования СГ актуальна разработка альтернативных подходов, не использующих знания о природе конкретных мутаций.

Идентификация точковых мутаций, представляющих собой замену одной пары нуклеотидов, с помощью обычного ПЦР-анализа представляется невозможной ввиду того, что длина мутантного фрагмента ДНК остается прежней. Изменяются только конформация и вместе с ней некоторые физико-химические свойства молекулы. Остановимся подробнее на двух распространенных методах выявления подобных точковых мутаций, используемых в данном исследовании, - гетеродуплексном анализе (ГА) и рестрикционном анализе [Горбунова, Баранов, 1997; Геномика – медицине, 2005] .

Гетеродуплексный анализ (heteroduplex analysis) (греч. heteros - другой, разный; лат. duplex - двойной; греч. analysis - разложение, расчленение) [Арефьев, Лисовенко, 1995] основан на неполной гомологии между двумя цепями ДНК из разных источников, например, из разных гомологичных хромосом. ГА использует различия в электрофоретической подвижности гомо- и гетеродуплексной ДНК, позволяя тем самым обнаружить мутации, находящиеся в компаунде или в гетерозиготном состоянии. Это имеет большое значение, так как чаще всего мутации, вызывающие генные заболевания, наследуемые по аутосомно-рецессивному типу, находятся в компаунде, то есть оба аллеля имеют нарушения, различные по молекулярной природе и локализации внутри гена [Горбунова, Баранов, 1997]. Исключение составляют лишь мажорные мутации, частота которых в популяции достигает десятков процентов. Примерами таких мутаций являются дельтаF508 в гене муковисцидоза или мутация R408W в гене фенилкетонурии [Геномика – медицине, 2005]. При амплификации относительно небольших фрагментов генов гетерозигот или гомозиготных компаундов мутация может оказаться локализованной лишь в одной гомологичной нити ДНК-матрицы. В амплификационной смеси в таком случае образуется 3 типа молекул ДНК: 2 типа гомодуплексов – из 2-х нормальных и из 2-х мутантных цепей – и молекулы, несущие мутации только в одной цепи – гетеродуплексы. При электрофорезе в полиакриламидном геле (ПААГ) обнаруживается, что гетеродуплексы отличаются по электрофоретической подвижности от гомодуплексов, у которых она одинакова. С уменьшением гомологии между образующими его нуклеотидными последовательностями уменьшается и степень подвижности гибридных молекул. Это связано с тем, что частично комплементарные структуры имеют большие эффективные размеры по сравнению с полностью комплементарными (за счет конформационных особенностей в местах несовпадения нуклеотидов, так называемых mismatch) [Геномика – медицине, 2005].

Вероятность детекции точковых мутаций методом гетеродуплексного анализа на фрагменте ДНК менее 300 пар оснований составляет от 80% до 90% [Геномика – медицине, 2005]. Детекция мутаций осуществляется как изотопным, так и неизотопными методами. Эффективность повышается при использовании для разделения молекул вместо ПААГ специальных матриц, улучшающих разделение гибридных молекул (Hydrolink либо MDE) и флуоресцентных красителей [Геномика – медицине, 2005]. Необходимо отметить, что результаты применения данного метода обязательно должны подвергаться проверке прямым секвенированием исследуемого фрагмента ДНК, так как только оно дает исчерпывающие сведения о типе и характере изменений в последовательности нуклеотидов.

Рестрикционный анализ (restriction analysis) (лат. restriction – ограничение; греч. analysis – разложение, расчленение) [Геномика – медицине, 2005] основан на способности специфических ферментов эндонуклеаз – рестриктаз – расщеплять фосфодиэфирные связи в молекуле ДНК не произвольно, а в местах с определенной нуклеотидной последовательностью – так называемых сайтах рестрикции (участках узнавания). Более широко используются в молекулярной генетике рестриктазы, «узнающие» и разрезающие ДНК в местах фрагмента, обладающих центральной симметрией и считывающихся одинаково по обе стороны от разрыва. В настоящее время из бактерий выделено более 175 разнообразных эндонуклеаз рестрикции, позволяющих расщеплять ДНК более чем по 150 сайтам узнавания.

Далее продукты расщепления ДНК подвергаются гель-электрофорезу в агарозном геле или ПААГ, что позволяет определить размер конкретных фрагментов: мелкие фрагменты перемещаются быстрее более крупных, и длина их пробега в геле больше. Для визуализации результатов гель окрашивают бромистым этидием и фотографируют в УФ-излучении. Таким образом можно обнаружить участки, подвергнутые мутациям, так как изменения даже в одиночном нуклеотиде приводят к появлению или потере места разрезания. В результате изменяется количество получаемых фрагментов ДНК, в то время как в специфическом гене имеется строго определенное (генетически детерминированное) количество сайтов узнавания для каждой специфической рестриктазы. Результаты сравниваются с теоретически рассчитанной картиной фрагментации ДНК, и расхождения могут служить маркерами различных нарушения в первичной структуре ДНК.

На расщеплении ДНК эндонуклеазами рестрикции основан также ПДРФ-анализ. Определение полиморфного сайта рестрикции методом RFLP (restriction fragment length polymorphism) заключается в ПЦР-амплификации интересующего фрагмента и его последующем расщеплении соответствующей рестриктазой [Геномика – медицине, 2005].

Для расщепления и детекции гетеродуплексов используются резольваза (эндонуклеаза VII), выделенная из бактериофага Т4, S1 нуклеаза, рибонуклеазы, новая эндонуклеаза растений, MutS и MutY белки [Геномика – медицине, 2005].

Преимущество рестрикционного анализа заключается в том, что он может быть применен как для небольших участков ДНК длиной в несколько десятков пар нуклеотидов, так и для целых геномов эукариотических организмов размерами более 1 млрд. п.о. Однако обычно рестрикционному анализу подвергают ПЦР-фрагменты ДНК длиной от 200 до 1000 п.н. Метод используется не только для детекции специфических мутаций, но и для установления видовой принадлежности тестируемого организма, определения генетического родства, в качестве начального этапа перед секвенированием ДНК.

Объектом нашего исследования является генетический материал трех пациентов: пробанда (№39), её сестры (№38) и сына (№151), более подробные данные о пациентах указаны в главе «Результаты исследования», в таблице 3.

В исследовательской части работы была поставлена следующая цель: проведение молекулярно-генетического анализа в семье с СГ из Петрозаводска, в которой ранее методом секвенирования у пробанда были идентифицированы мутации гена рЛНП.

Теоретической задачей являлось определить наличие мутаций у родственников пациентки и сделать предсказание относительно риска заболевания у сына пробанда.

Также были поставлены практические задачи:

1)Амплифицировать методом ПЦР 9-ый и 11-ый экзоны гена рЛНП, в которых у пробанда были выявлены нуклеотидные замены, у пациентки, ее сына и сестры;

2)Подобрать рестриктазы для типирования мутаций с помощью анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализа)

Для достижения цели и выполнения задач нам были использованы следующие методы:

ПЦР производили для выделенных образцов ДНК пациентов. Мы не могли самостоятельно делать выделение, так как кровь – потенциально патогенный материал (в ней могут находиться вирусы СПИДа, гепатита и других опасных заболеваний).

В нашей работе ПЦР проводили в реакционной смеси конечным объемом 30 мкл.

Состав реакционной смеси:



Название компонента

Количество/концентрация

Праймер левый

10 пкМ

Праймер правый

10 пкМ

ДНК-полимераза

5 единиц

10x буфер

1х буфер

MgCl2

1,5 мМ/литр

dNTPs (dATP, dTTP, dGTP, dCTP)

200 мкМ/литр

H2O

до объема 30 мкл


Использованные в работе праймеры для амплификации фрагментов гена рЛПН. Таблица 1.


Участок

Последовательность

Тотжига

Размер продукта

Экзон 9

5’ TCCATCGACGGGTCCCCTCTGACCC 3’

5’ AGCCCTCATCTCACCTGCGGGCCAA 3'



62ºС

273 п.н.

Экзон 11

5’ CAGCTATTCTCTGTCCTCCCACCAG 3’

5’ TGGGACGGCTGTCCTGCGAACATAC 3’



60ºС

169 п.н.

Праймеры для амплификации экзонов 9 и 11 гена рЛНП были синтезированы по опубликованной последовательности (Hobbs et al., 1992).

ДНК добавляли к реакционной смеси в количестве 100 нг. В качестве контроля в каждый опыт по амплификации включали пробу, не содержащую геномной ДНК. ПЦР проводили в центрифужных пробирках объемом 0,5 мл на аппарате “Терцик” (“ДНК-Технология”) с набором программ, определяющих температурный режим ПЦР.

Температурный профиль ПЦР:

5 минут 95°С

1минута 95°С (денатурация)

1минута 62ºC или 60°С (отжиг) 30 циклов

1минута 72°С (достройка)

9 минут 72°С

При амплификации гетерозиготной по мутации ДНК спонтанно образовались гетеродуплексы.


1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   15

  • Общение с представителями британской ассоциации «HMS Belfast»
  • Демографический портрет школы № 186
  • Демографическая ситуация школы.
  • Численность учащихся школы №186 за последние 10 лет.
  • Возрастной состав учащихся школы. [10]
  • Этнический состав школьников.
  • Семейный анализ в родословной с мутацией гена рецептора липопротеинов низкой плотности